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發(fā)布時(shí)間：2021/6/10 8:52:08 閱讀次數：1338
樣本處理及要求
1. 血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,然后1000×g離心20
分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融.
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000
×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融.
3. 組織勻漿:用預冷的PBS （0.01M, pH=7.4）沖洗組織,去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞
會(huì )影響測量結果）,稱(chēng)重后將組織剪碎.將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量
體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實(shí)驗需要適當調整,并做好記
錄.推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨.為了進(jìn)一步裂
解組織細胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復凍融.后將勻漿液于5000×g離心5~10
分鐘,取上清檢測.
4. 細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置
于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融.訂購聯(lián)系當地經(jīng)銷(xiāo)商 技術(shù):經(jīng)銷(xiāo)商轉廠(chǎng)家
注:標本溶血會(huì )影響后檢測結果,因此溶血標本不宜進(jìn)行此項檢測.
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL 2-20uL 20-200uL 200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱(chēng) 96 孔配置 48 孔配置 備注
微孔酶標板 12 孔×8 條 12 孔×4 條 無(wú)
標準品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 無(wú)
樣本稀釋液 6mL 3mL 無(wú)
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無(wú)
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物 A 6mL 3mL 無(wú)
底物 B 6mL 3mL 無(wú)
終止液 6mL 3mL 無(wú)
封板膜 2 張 2 張 無(wú)
說(shuō)明書(shū) 1 份 1 份 無(wú)
自封袋 1 個(gè) 1 個(gè) 無(wú)
備注:
1. 標準品濃度依次為:48 24 12 6 3 1.5 nmol/L
2. 經(jīng)過(guò)大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實(shí)驗過(guò)程中
直接取50μL樣本上樣即可.當有部分樣本值超過(guò)大標準品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標本
進(jìn)行適當稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗.
注意事項
1. 嚴格按照規定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準確結果.所有試劑都必須在使用前達到室
溫 20-25℃.使用后立即冷藏保存試劑.
2. 洗板不正確可以導致不準確的結果.在加入底物前確保盡量吸干孔內液體.溫育過(guò)程中
不要讓微孔干燥掉.
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響 OD 值.
4. 底物顯色液應呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用.
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果.
6. 在儲存和溫育時(shí)避免強光直接照射.訂購聯(lián)系當地經(jīng)銷(xiāo)商 技術(shù):經(jīng)銷(xiāo)商轉廠(chǎng)家
7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上.
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體.任何漂白成分都會(huì )破壞
試劑盒中反應試劑的生物活性.
9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品.
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置.
試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用.
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水.
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃.
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本 50μL;空白孔不加.
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體
100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱
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