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發布時間：2025/3/12 9:44:49 閱讀次數：273

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一 實驗原理

CCK-8(Cell Counting Kit-8)是一種基于水溶性四唑鹽(WST-8)的高靈敏度細胞活性檢測方法.其核心原理是：活細胞線粒體內的脫氫酶可將WST-8還原為橙黃色甲臜(Formazan),生成的甲臜量與活細胞數量成正比.通過檢測450nm波長下的吸光度(OD值),可間接反映細胞增殖或毒性狀態.相較于傳統MTT法,CCK-8無需溶解步驟毒性低且靈敏度更高(可檢測低至1000個細胞).

二實驗步驟詳解

在CCK-8增殖實驗中,精確的實驗步驟是獲取可靠結果的關鍵.下面我們詳細討論實驗的核心步驟：

細胞種植處理細胞并確定合適的種植密度.通常,細胞需要在無菌條件下傳代,使用含有適當抗生素的培養基以防污染.

種植密度應根據細胞類型和實驗設計調整,確保細胞在實驗過程中能達到適宜的生長狀態.一般推薦在每個孔中種植數千至數萬細胞,具體數字根據細胞的生長速率和實驗的持續時間而定.

添加CCK-8試劑實驗的下一步是添加CCK-8試劑.

在添加前,先按照說明書推薦的比例對試劑進行稀釋.

添加量通常是根據培養板孔的體積而定,例如,每個96孔板的孔中添加10微升試劑.添加試劑后,將培養板輕輕晃動幾次,以確保試劑與培養基充分混合.

然后將培養板放回細胞培養箱中,根據細胞類型,孵育時間通常在1到4小時之間.

觀察與記錄

在孵育期間,重要的是保持培養箱的條件穩定,并避免頻繁打開以減少溫度和濕度的波動.數據記錄是實驗中至關重要的一步.

從培養板中取出后,應立即使用酶標儀測量吸光度.記錄每個孔的讀數,注意任何異常值或可能的污染跡象.

三 數據處理與分析

在CCK-8實驗中,數據處理與分析是揭示實驗結果的關鍵步驟.以下是詳細的分析流程：

數據的讀取完成孵育后,使用酶標儀讀取吸光度是第一步.確保酶標儀校準正確,設置適當的波長（通常為450 nm）.將培養板放置在儀器中,儀器將自動測量每個孔中的吸光度值.這些值反映了培養孔中細胞的活性,從而可以評估細胞的增殖情況.

數據分析獲取吸光度數據后,下一步是計算細胞存活率.將實驗組和對照組的平均吸光度值進行比較.細胞存活率可以通過以下公式計算：

（實驗組吸光度 - 空白組吸光度）/（對照組吸光度 - 空白組吸光度）× 100%

使用圖表軟件如Excel或專業統計軟件如GraphPad Prism,可以繪制出生長曲線,直觀展示細胞增殖趨勢.

結果解釋分析數據時,重要的是評估實驗結果的可靠性.檢查數據是否有異常值,比如意外的吸光度高值或低值,這可能表明操作錯誤或污染.同時,確保重復實驗的結果一致性.數據一致性高通常表示實驗操作穩定,結果可靠.

另外,結果的生物學意義也需考慮,比如細胞反應是否符合預期的生物學行為.通過這些步驟,不僅可以保證數據處理的精確性,還能深入理解實驗結果背后的生物學意義,為進一步的研究提供堅實的數據支持.

四 注意事項與常見問題

常見問題及解決方案

試劑穩定性：確保CCK-8試劑儲存于推薦的條件下,通常是避光冷藏.使用前務必檢查試劑是否有變色或沉淀現象,這可能影響實驗結果的準確性.

細胞污染：操作中應始終保持無菌環境.使用無菌操作臺和經過嚴格消毒的工具.如果發現細胞污染,應立即丟棄受污染的細胞,并徹底清潔所有設備和工作區域.

實驗技巧分享

均勻添加試劑：添加CCK-8試劑時,使用多通道移液槍以保證每個孔中試劑量的一致性.輕輕晃動培養板,使試劑與培養基充分混合,避免產生氣泡.

準確計時：設置明確的計時提醒,以確保所有孔的孵育時間一致,防止由于時間差異導致的數據偏差.

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