當前位置：首頁 > ELISA高敏試劑盒 > 高敏熱門試劑盒> 科研-人4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶（HPD）檢測試劑盒
| 反應種屬 | 人 |
| 檢測范圍 | 1.562ng/ml– 50ng/ml。 |
| 物理性能 | 試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。 |
| 用途 | 用于檢測血清、血漿、細胞培養上清液等樣本中人4-羥基苯丙 酮酸雙加氧酶(HPD)的濃度。 |
| 實驗原理 | 本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被抗 人4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶(HPD)抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加 入人4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶(HPD)校準品和待測樣本，再加入生物素標 記抗體，經過溫育與充分洗滌后，再加入HRP偶聯的親和素，經過溫育 與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原 生物素標記抗體-親和素酶的夾心復合物。加TMB顯色液，產生藍色產物， 在終止液作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀450nm波長上測定吸光度 （OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中人4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶 (HPD)的濃度正相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中人4-羥基苯丙 酮酸雙加氧酶(HPD)的濃度。 |
| 特異性 | 本試劑盒識別天然人4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶(HPD)，與結 構類似物無交叉。 |
| 重復性 | 批內變異系數 CV%小于 15%，批間變異系數 CV%小于 15%。 |
| 回收率 | 回收率在 85%-115%之間 |
| 試驗所需自備試驗器材 | 1、酶標儀（450nm） 2、精密移液器及一次性吸頭 3、蒸餾水 4、洗瓶或者自動洗板機 5、37℃水浴鍋或恒溫箱 6、500ml 量筒 |
| 操作程序 | 1. 將各種試劑移至室溫平衡兩小時，取濃縮洗滌液，根據當批檢測數量，用蒸餾水 1：20 稀釋，混勻后備用。 2. 將預包被板從密封袋中取出，設一個空白對照孔，不加任何液體；每個校準品設 2 孔，每孔加入對應校準品 50μl；其余每個檢測孔直接加待測血清或質控品 50μl。 3. 除空白孔外所有孔加入生物素化抗原 50μl，混勻，貼上封板膜，置 37℃溫育 60 分鐘。 4. 手工洗板：棄去孔內液體，洗滌液注滿各孔，靜置 10 秒甩干，重復 3 次后拍干。洗板機洗板：選擇洗滌 3 次程序洗板后拍干。 5. 每孔加入酶標親合素 50μl（空白對照孔除外），混勻，貼上封板膜，置 37℃溫育 30 分鐘。 6. 手工洗板：棄去孔內液體，洗滌液注滿各孔，靜置 10 秒甩干，重復 3 次后拍干。洗板機洗板：選擇洗滌 3 次程序洗板后拍干。 7. 每孔加顯色劑 A 50μl，顯色劑 B 50μl，振蕩混勻后，置 37℃避光顯色 15 分鐘，每孔加終止液 50μl。 用酶標儀讀數，取波長450nm，先用空白對照孔調零點，然后測定各孔光密度值（OD值）。 |
| 注意事項 | 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請確保上一次使用之后沒有被污染。 2：酶標板單次未使用完，要謹記密封放到 2-8℃保存。 |
| 問題分析 | ①問題描述：標準曲線差 可能原因及相應對策： 1.試劑盒平衡時間不夠——不低于 2 個小時的室溫平衡 2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌 3.移液不精確——檢查和校正移液器 ②問題描述：精密度低 可能原因及相應對策： 1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡 2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑 3.重復利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模 4.加樣不精確——檢查和校正移液器 ③問題描述：O.D值低 可能原因及相應對策： 1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑 2.溫育時間不正確——保證充足的溫育時間 3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度 4.酶標記物或底物失效——通過混合酶標記物和底物，顏色迅速顯現來檢查 5.沒有加入終止液——按照說明書實驗操作步驟加入終止液 6.超出讀數時間讀數——在說明書推薦的讀數時間內讀數 ④問題描述：樣本值 可能原因及相應對策： 1.不正確的樣本儲存方式——正確儲存樣本，使用新鮮樣本進行實驗 2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法 3.待測物質在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復實驗 |
| 聲明 | 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對因此產生的問題負責，亦不承擔任何法律責任。 |
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